辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝
簡要描述:貨 號:P1200名 稱:辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝規(guī) 格:一套價 格:560
產(chǎn)品型號:
所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑
更新時間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記套裝
組成 | 規(guī)格 |
HRP(辣根過氧化物酶) | 10mg |
NaIO4 | 500mg |
NaBH4 | 100mg |
100mM乙酸鈉(PH4.4) | 5ml |
0.2M PH9.5 CB | 25ml |
透析袋MD10(8000-14000) | 20CM |
透析袋MD25(8000-14000) | 20CM |
鐵夾(夾透析袋) | 兩支 |
保存條件:HRP(辣根過氧化物酶)-20度保存,透析袋2-8度處理。其他常溫保存。
產(chǎn)品說明:本套裝是將HRP標(biāo)記的常用試劑集合為一體而成。本操作流程為經(jīng)碘的高碘酸氧化法。適合于蛋白等含有氨基物質(zhì)的標(biāo)記。特別是抗體的標(biāo)記。
如果待標(biāo)記物分子量太小(如小于15KD),可能會穿過透析袋而造成樣品損失。
標(biāo)記原理:在低PH下使RP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛基可蛋白等分子的氨基相連,形成斯夫氏鹼,后者可進(jìn)一步用NaBH4還原生成穩(wěn)定的酶標(biāo)記物。
操作方法:
一, 標(biāo)記量的計(jì)算:HRP(辣根過氧化物酶)分子量為40KD左右。一般為HRP:待標(biāo)記物=2:1到4:1之間。比如抗體IgG分子量一般為150-160KD。則10mg HRP可標(biāo)記抗體在10mg-20mg之間。
二, 計(jì)算好各步反應(yīng)時間。作好開始標(biāo)記的準(zhǔn)備工作,是從下午開始。將HRP(辣根過氧化物酶)一共10mg加入1ml雙蒸水溶解。溶解后可放-20度存放一個月。如果想作兩次標(biāo)記,可適當(dāng)稱量5mg。但并不推薦稱量更小的質(zhì)量。以免產(chǎn)生更大誤差。而且透析袋一般也只夠兩次用量。
三, 剪切合適長度透析袋,用雙蒸水清洗三次備用。透析袋分寬窄兩種,適合于不同量樣品的透析,請自己安排。稱取21.3mg NaIO4,加入0.5ml雙蒸水溶解(現(xiàn)配現(xiàn)用,濃度為0.2M),將100mM乙酸鈉(PH4.4)用雙蒸水稀釋100倍成1mM乙酸鈉(PH4.4)。準(zhǔn)備待標(biāo)記物,如果待標(biāo)記物本身鹽含量很低并且緩沖力差,如生理鹽水,可等二天再準(zhǔn)備。如果不確定,將0.2M PH9.5 CB稀釋20倍(請不要一次稀釋完,留1-2ml左右備用),作為透析液,將待標(biāo)記物裝入透析袋中4℃透析過ye,透析袋適當(dāng)留長約2ml體積的量以備第二天加入酶(透析袋使用請見附錄)。
四, 以一次標(biāo)記完為例,如果標(biāo)記量小,可按比例減小試劑的用量。取0.2ml現(xiàn)配的NaIO4溶液加入HRP溶液中,混勻,避光常溫反應(yīng)兩小時。裝入透析袋中,在稀釋過的乙酸鈉(PH4.4)溶液中4℃透析過ye(透析袋使用請見附錄)。
五, 第二天早上,如果樣品為固體,可用水溶解,加入1/20體積的0.2M PH9.5 CB,混勻。取出活化好的HRP裝入一適合離心管中,加入50ul 0.2M PH9.5 CB,混勻,立刻加入待標(biāo)記物中,混勻。避光常溫反應(yīng)兩小時。
六, 加0.1ml新配的10mg/ml NaBH4液,混勻,常溫半小時。
七, 配制合適的透析液,如生理鹽水或者PBS等。透析酶標(biāo)記物。
八, 如果有條件進(jìn)一步純化,可透析半天后去進(jìn)一步純化,如果不純化,請?jiān)?℃透析至少24小時。勤換液。
附透析袋使用方法:
本透析袋已預(yù)處理過,用雙蒸水清洗后將水用適當(dāng)吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用鐵夾,但如果鐵夾不夠用,下部可用細(xì)線或者其他的透析袋夾。
將透析袋輕輕的折上兩到三折。用線或者透析袋夾封住,上面支開,加入待透析物,留一定量的空氣在頂上,并小心的折一折,用鐵夾夾住,輕輕的擠壓,如沒發(fā)現(xiàn)有液體流出,可放入透析液中。一般透析可用純凈水瓶去頂使用。用一次性筷子或者其他合適物穿過鐵夾,將透析袋吊在透析液中,補(bǔ)充透析液,使透析液蓋過透析袋中的液面而不要淹過鐵夾下面。
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