福爾根(Feulgen)染色液
簡要描述:貨 號(hào):FXC0720名 稱:福爾根(Feulgen)染色液規(guī) 格:100ml價(jià) 格:280
產(chǎn)品型號(hào): FXC0720
所屬分類:染色液
更新時(shí)間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
福爾根(Feulgen)染色液說明書
福爾根(Feulgen)染色液反應(yīng)原理:
DNA 經(jīng)酸(1mol/L HCl)水解后,嘌呤堿與脫氧核糖間的糖苷鍵被打開,并且使脫氧核糖與磷酸間的磷酯鍵斷開,在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。醛基在原位與 Schiff 試劑結(jié)合,形成紫紅色化合物,使細(xì)胞內(nèi)含有 DNA的部位呈紫紅色陽性反應(yīng)。紫紅色的產(chǎn)生是因?yàn)榉磻?yīng)產(chǎn)物的分子內(nèi)有醌基(醌基是一個(gè)具有顏色的發(fā)色團(tuán)),所以含有 DNA 的部位,呈紫紅色。而RNA用此法處理后則分解。
試劑組成 | 規(guī)格 | 保存條件 |
Schiff試劑 | 100ml | 2-8℃避光 |
重亞硫酸鹽溶液 | 100ml | 2-8℃避光 |
保質(zhì)期:2-8℃避光6個(gè)月。
福爾根(Feulgen)染色液操作步驟
本染色液采用經(jīng)典方法配制,染色方法可參考文獻(xiàn)或者實(shí)驗(yàn)室留傳下來的方法,或者參考下面的方法。
處理準(zhǔn)備標(biāo)本,同時(shí)準(zhǔn)備60℃的1M的鹽酸溶液。
1.切片脫蠟入水(洋蔥表皮等類似標(biāo)本,固定,梯度乙醇后入水)。
2.切片放入60℃的 1M的鹽酸溶液中約5-15分鐘(水解時(shí)間因標(biāo)本及固定液不同而有差異,)。
3.滴加或者浸入Schiff試劑,反應(yīng)30-60分鐘(此步為避光反正,在通風(fēng)處,用完試劑請(qǐng)馬上蓋嚴(yán))。
4.吸干或者甩去Schiff試劑(如果不用重亞硫酸鹽溶液洗,此步可直入水沖洗)
5.用重亞硫酸鹽溶液清洗,,用完蓋嚴(yán)(一般此步可省,直接用蒸餾水洗)。
6.在蒸餾水中充分沖洗。
7.封片(要保存染色結(jié)果,請(qǐng)經(jīng)酒精脫水,二甲苯透明并封片)。 如果只簡單的立刻觀察,可直接在有少量水的情況下壓片。顯微鏡觀察。
福爾根(Feulgen)染色液注意事項(xiàng)
1.此試劑為接到訂單后我公司再配制,保質(zhì)期一般為6個(gè)月。但因?yàn)榻?jīng)常開蓋等原因造成SO2流失,試劑保質(zhì)期會(huì)變短,如果染色結(jié)果不佳,可適當(dāng)加入少量重亞硫酸鈉(鉀),加入量一般為0.1g/L
2.雖然Feulgen法是DNA的特異染色方法,但如果延長水解時(shí)間并在室溫下進(jìn)行反應(yīng), Schiff試劑也與醛、酮、醇和縮醛磷脂起反應(yīng),因此用Feulgen法檢測(cè)DNA時(shí)必須嚴(yán)格控制鹽酸水解的時(shí)間和溫度。為減少假陽性和非特異性染色必須做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。
3.由于Schiff試劑能與醛基結(jié)合,故不能用含醛的固定液固定組織,常用Carnoy固定液。Bouin液不適用于Feulgen反應(yīng),因?yàn)楣潭ㄒ褐泻^多的酸,可將DNA水解,影響染色反應(yīng)。