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SPL-230206共聚焦培養(yǎng)板,PS/Flux,TC處理 ,6孔,20Ø 滅菌 粘附型說(shuō)明

發(fā)布時(shí)間: 2023-07-25  點(diǎn)擊次數(shù): 917次

共聚焦實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)耗材的選擇

激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)標(biāo)記好的蛋白質(zhì)和分子,為生物學(xué)研究提供了更直觀的觀測(cè)方法。如今,激光共聚焦成像已經(jīng)是一個(gè)非常常規(guī)的實(shí)驗(yàn)操作,應(yīng)用于生物學(xué)各個(gè)研究領(lǐng)域中。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,如果要進(jìn)行一次激光共聚焦成像,除了要知道相關(guān)的顯微鏡參數(shù)設(shè)置和操作以外,樣品的準(zhǔn)備也是非常重要的一環(huán)。

爬片的使用

由于激光共聚焦實(shí)驗(yàn)對(duì)觀測(cè)耗材的底部有著比較高的要求,普通的培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板或者培養(yǎng)瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。

1.比較常用的是使用170μm左右厚度的蓋玻片作為激光共聚焦成像的細(xì)胞載體。但是使用蓋玻片,在實(shí)驗(yàn)操作上是非常麻煩的,有時(shí)候需要將蓋玻片清洗并且烘干滅菌,才能開(kāi)始使用。2.細(xì)胞爬片,雖然不需要清洗,但是還是需要進(jìn)行包被才能讓細(xì)胞正常貼壁生長(zhǎng)。通常是將處理好爬片直接放在多孔板中,然后鋪細(xì)胞,熒光染色后,再用鑷子將爬片拿出,反過(guò)來(lái)放在滴有封片劑(甘油配置)的載玻片上,再進(jìn)行成像。如圖一所示:

圖一:使用蓋玻片和細(xì)胞爬片的做免疫熒光方法示意圖。

玻底培養(yǎng)皿/板的使用方法

這里要介紹的方法,大大簡(jiǎn)化了樣品準(zhǔn)備流程,需要用到專為共聚焦實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的共聚焦培養(yǎng)皿。共聚焦培養(yǎng)皿的底部為0.16-0.19mm的硼硅酸鹽玻璃,結(jié)合了標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)皿/板的便利性和蓋玻片的成像優(yōu)勢(shì),可提供高倍放大顯微鏡及共聚焦圖像分析所需的最佳光學(xué)特性。

所有的操作都在培養(yǎng)皿中進(jìn)行,不再需要鑷子以及繁瑣的清洗,滅菌,包被程序(流程如圖二所示)

圖二:共聚焦專用培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備樣品流程,可以直接進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)-染色-成像操作

操作流程

1. 在超凈臺(tái)中打開(kāi)共聚焦專用培養(yǎng)皿的滅菌包裝,拿出培養(yǎng)皿,加入細(xì)胞懸液,蓋上皿蓋,放入培養(yǎng)箱中靜置,等待細(xì)胞貼壁。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)置合適密度再取出,進(jìn)行免疫熒光染色。

2. 吸出培養(yǎng)基,以PBS清洗細(xì)胞,再用2%的多聚甲醛PBS溶液固定細(xì)胞。

3. 20分鐘后,吸出固定液,加入0.1%Triton X-100

4. 10分鐘后,吸出Triton,清洗細(xì)胞后加入BSA封閉。

5. 加入抗體熒光染色后,吸出所有試劑,加入封片劑,可以開(kāi)始共聚焦顯微成像。

使用共聚焦培養(yǎng)皿還有個(gè)好處:往往一個(gè)共聚焦掃描成像持續(xù)時(shí)間很長(zhǎng),培養(yǎng)皿中的液體非常容易揮發(fā),共聚焦培養(yǎng)皿有皿蓋,可以減少揮發(fā)。


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