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細(xì)胞適應(yīng)B27無(wú)血清培養(yǎng)基的方法

發(fā)布時(shí)間: 2018-07-29  點(diǎn)擊次數(shù): 2632次
B27無(wú)血清培養(yǎng)基專門用來(lái)在無(wú)血清條件下培養(yǎng)特殊類型的細(xì)胞或進(jìn)行特殊應(yīng)用。
B27無(wú)血清培養(yǎng)基的使用展現(xiàn)了一種重要的培養(yǎng)方法:允許細(xì)胞培養(yǎng)
在一套限定條件下進(jìn)行,盡可能避免受到干擾參數(shù)的影響。
 
細(xì)胞適應(yīng)B27無(wú)血清培養(yǎng)基的方法
1.直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到B27無(wú)血清培養(yǎng)基中。
一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)B27無(wú)血清培養(yǎng)基。對(duì)于直接適應(yīng),接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時(shí),傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時(shí),細(xì)胞*適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到B27無(wú)血清培養(yǎng)基中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
(1)以2倍正常接種密度接種生長(zhǎng)活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到80%有血清培養(yǎng)基:30%sfm混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
(2)當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時(shí),以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,在有血清培養(yǎng)基:sfm為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(3)以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75%sfm中傳代培養(yǎng)。
(4)當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml(接種后4到6天),在100%sfm培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(5)每隔3到5天,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml,細(xì)胞活率在90%時(shí),貯備的適應(yīng)了B27無(wú)血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
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