全血基因組DNA提取試劑盒
簡(jiǎn)要描述:貨 號(hào):D0024名 稱:全血基因組DNA提取試劑盒規(guī) 格:50T/200T價(jià) 格:360.00/1180.00
產(chǎn)品型號(hào):
所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑
更新時(shí)間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
全血基因組DNA提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
蛋白酶K(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
紅細(xì)胞裂解液(10×) | 30ml | 120ml | RT |
裂解液 | 12.5ml | 50ml | RT |
結(jié)合液 | 25ml | 100ml | RT |
玻璃奶 | 2.5 | 10ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
全血基因組DNA提取試劑盒原理簡(jiǎn)介
本試劑盒適用于各種動(dòng)物抗凝全血樣本,用于從中提取基因組DNA。*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質(zhì),并利用玻璃奶吸附DNA,進(jìn)一步的去掉其他雜質(zhì),提取出來(lái),得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1.裂解液低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
3.RNaseA經(jīng)常使用可放2-8度保存,蛋白酶K請(qǐng)放-20度保存。
4.同一樣本,如果想大量提取,可以增加樣本量,并且每一步試劑加量,但使用次數(shù)會(huì)成倍減少。
操作步驟
在合適的容器中,用雙蒸水將紅細(xì)胞裂解液(10×)稀釋成1×。即10ml溶液中加入90ml雙蒸水混勻。
1.取不超過(guò)500ul抗凝血,加入三倍體積的稀釋過(guò)的紅細(xì)胞裂解液,混勻。放置2分鐘,12000rpm離心1分鐘。去上清。再加入2倍體積的紅細(xì)胞裂解液,用移液器輕輕吹打沉淀,充分混勻,離心,棄上清,沉淀為白細(xì)胞。如果血液為家擒類動(dòng)物,因?yàn)榧t細(xì)胞有核,所以可以省去此步,但加入的樣品量不要超過(guò)50ul,直接進(jìn)入下一步。
2.加入250ul裂解液,加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液,振蕩混勻,室溫放置5-10分鐘。
3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液,顛倒混勻,65℃放置10-30分鐘,期間顛倒3-5次,小心內(nèi)心管蓋受熱開啟。如30分鐘沉淀無(wú)法*消失,請(qǐng)注意第6步處理。
4,在上清中加入三倍體積無(wú)水乙醇,充分混勻。
5.12000rpm離心5分鐘,吸去上清,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul結(jié)合液,65℃水浴1-2分鐘,核酸沉淀可溶解(如無(wú)法*溶解,可轉(zhuǎn)移上清到一新的離心管中,棄沉淀)。
6.玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶,混勻,室溫放置2分鐘,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復(fù)洗一次,再用無(wú)水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
7.室溫放置10分鐘(如果玻璃奶加量,請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)放置時(shí)間,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實(shí)驗(yàn)),加入50-100ul TE緩沖液混勻溶解,65℃水浴5分鐘。離心,取上清為所提基因組。
8.電泳或者其他方法檢測(cè),進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。
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