RNA/DNA病毒基因組提取試劑盒

RNA/DNA病毒基因組提取試劑盒

原理簡(jiǎn)介
本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取RNA病毒基因組，也可用于DNA病毒基因組的提取。本試劑盒利用蛋白酶K破開病毒外殼，放出RNA/DNA，用玻璃奶吸附達(dá)到純化目的。
使用本試劑盒提取的RNA/DNA可用于各種常規(guī)操作，包括RT-PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)
1．一般病毒含量過(guò)低，zui后提取的基因組RNA/DNA電泳無(wú)法檢測(cè)到，但RT-PCR/PCR等其他實(shí)驗(yàn)還會(huì)有結(jié)果。
2．同一樣本，如果想大量提取，可以增加樣本量，并且每一步試劑加量，但使用次數(shù)會(huì)成倍減少。
3． 所有離心步驟用低溫離心機(jī)在4℃條件下離心，如果實(shí)驗(yàn)室沒有低溫離心機(jī)，也可以使用常溫離心機(jī)，但所提得的RNA可能會(huì)降解嚴(yán)重些。

操作步驟
準(zhǔn)備工作：使用前請(qǐng)先開啟一瓶新的無(wú)水乙醇，倒入漂洗液中，倒?jié)M至離瓶口約0.5-1ml，蓋上瓶口，搖勻。
1、 取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量取上清使用，棄去沉淀。
2、 向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
3、 向管中加入500ul結(jié)合液，充分混勻。
4．玻璃奶搖勻。加入25ul搖勻的玻璃奶，混勻，室溫放置2分鐘，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入800ul漂洗液，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清，再用600ul漂洗液洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清。
7．室溫放置10分鐘，加入30－50ul洗脫緩沖液混勻溶解，靜置5分鐘。離心，取上清為所提RNA。