Bradford蛋白濃度測定試劑盒
簡要描述:貨 號:P0120名 稱:Bradford蛋白濃度測定試劑盒規(guī) 格:2500微孔價 格:150.00
產(chǎn)品型號:
所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑
更新時間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
組成 | 包裝(2500微孔) | 保存 |
5×G250染色液 | 100ml | 2-8℃ |
PBS稀釋液 | 30ml | 2-8℃ |
蛋白標準(5mg/ml BSA) | 1ml | -20℃ |
本試劑盒自訂購之日起九個月內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標板或者200ul比色皿時可做2500孔。當使用2ml比色皿時可做250孔,如果是1ml比色皿時可做500孔。
Bradford蛋白濃度測定試劑盒產(chǎn)品簡介:
考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的zui大吸收峰的位置(lmax),由465nm變?yōu)?95nm,在一定的濃度范圍內(nèi),測定的吸光度值A595,與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測定試劑盒。
操作說明:
一,微孔酶標儀法
1. *溶解蛋白標準品,取10ml,加240ulPBS稀釋至250ml ,使終濃度為0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中,標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。
2. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻,取1ml 5×G250染色液,加入4ml雙蒸水,混勻成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
3. 將標準品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中,加PBS稀釋液補足到20微升。
4. 將樣品作適當稀釋(多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差,標準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。
5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液,室溫放置3-5分鐘。
6. 用酶標儀測定A595,或560-610nm之間的其它波長的吸光度。
7. 根據(jù)標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。
二,分光光度計法
如沒有酶標儀,可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。
步驟如下:
1,取八支(或者更多)干凈的10ml離心管,標記上號。
2,取100ulBSA,加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml。
3,5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻,取10ml 5×G250染色液,加入40ml雙蒸水,混勻成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
4,按下表加入試劑(以每孔5ml計,多余的用來潤洗比色皿)
離心管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7(樣品管1) | 8(樣品管2) | 9(樣品管3) |
標準蛋白BSA | 0 | 100ul | 200ul | 300ul | 400ul | 500ul | 500ul適當稀釋的樣品1 | 500ul適當稀釋的樣品2 | …… |
PBS | 500ul | 400ul | 300ul | 200ul | 100ul | 0 | 0 | 0 | 0 |
1×G250染色液 | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml | 5ml |
5,反應3分鐘后測OD值。為了實驗的準確性,可每間隔2分鐘加一管染色液,每間隔2分鐘測一管OD值。如下表。
離心管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | …… |
加染色液(分鐘) | 0 | 2 | 4 | 6 | 8 | 10 | 12 | 14 | …… |
測OD值 | 3 | 5 | 7 | 9 | 11 | 13 | 15 | 17 | …… |
現(xiàn)貨供應