細(xì)胞核提取試劑盒
簡要描述:貨 號(hào):P0050名 稱:細(xì)胞核提取試劑盒規(guī) 格:50T/100T價(jià) 格:320.00/580.00
產(chǎn)品型號(hào):
所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑
更新時(shí)間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
細(xì)胞核提取試劑盒
一,試劑盒組份
組份 | (50T) | (100T) |
Lysis Buffer | 100 mL | 200 mL |
Reagent A | 2.5mL | 5mL |
Medium Buffer | 25 ml | 50 ml |
Store Buffer | 5mL | 10mL |
二,細(xì)胞核提取試劑盒說明
用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高,可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,性能穩(wěn)定。
三,操作步驟
1. 樣本處理
a. 組織勻漿:稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等,PBS或生理鹽水沖洗,洗凈血水,濾紙吸干,用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織,可用雙層紗布過濾。
b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿:消化細(xì)胞,PBS洗滌,800 × g 5~10 min離心收集細(xì)胞。計(jì)數(shù)。每次提取需要5 × 107個(gè)細(xì)胞,加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞,再加入50ul Reagent A,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi),0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5ml離心管中,4℃,700× g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀;
3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer,吸取上一步的重懸液,沿管壁小心地加入到此離心管中,置于Medium Buffer之上,4℃, 700 × g 離心5min。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管,細(xì)胞核沉淀在管底;
5. 棄上清,在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉,1000 × g 離心10min ,棄上清,得較純的細(xì)胞核沉淀;
6. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀,立即使用或-70℃保存。
四 注意事項(xiàng):
1. 為保證獲得完整的細(xì)胞核,*是全程低溫操作。第二是快速。第三,在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞是制備細(xì)胞核的zui關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比,培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時(shí)較難破壁,因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度,不同的離心機(jī)可據(jù)此精確計(jì)算離心速度。
3. 進(jìn)行Western Blot和2D-膠電泳,可直接加入上樣緩沖液裂解細(xì)胞核。
五 儲(chǔ)存:四周內(nèi)使用可4℃儲(chǔ)存,長期置-20℃
轉(zhuǎn)速與離心力換算
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G為離心力,一般以g(重力加速度)的倍數(shù)來表示;
[rpm] 2即:轉(zhuǎn)速的平方; R為半徑,單位為厘米。