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sigma蛋白酶k使用方法

發(fā)布時(shí)間: 2016-08-26  點(diǎn)擊次數(shù): 2582次
sigma蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解??梢杂糜谙鞣N蛋白。用于各種常見(jiàn)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等相關(guān)實(shí)驗(yàn),例如基因組DNA抽提、酶的消化去等。
酶活力,>30U/mg。在37℃,以血紅蛋白為底物,1分鐘內(nèi)可以產(chǎn)生相當(dāng)于1微摩爾酪氨酸Folin陽(yáng)性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量,定義為一個(gè)單位sigma蛋白酶k酶活力。
在很寬的pH范圍內(nèi)有效,有效的pH范圍為pH4.0-12.5,*pH范圍為pH7.5-8.0。
sigma蛋白酶k的*反應(yīng)溫度為65℃,但在65℃或更高的溫度sigma蛋白酶k自身的也非常迅速地降解。很多時(shí)候反應(yīng)溫度選擇50-55℃。
在0.2-1%SDS或約10mM尿素存在的情況下,蛋白酶K顯示更高的酶活性。sigma蛋白酶k的常用工作濃度為0.05-1mg/ml,根據(jù)所用緩沖液是否含有SDS、尿素、pH是否適合、溫度是否適合等因素確定具體的工作濃度。
 
sigma蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。sigma蛋白酶k不被金屬離子、螯合劑、巰基試劑或胰蛋白酶/麋蛋白酶蛋白抑制劑失活。sigma蛋白酶k也是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。
 
sigma蛋白酶k使用:
孵育溫度為55至65℃,sigma蛋白酶k在65ºC 的活性比 25ºC的活性高12倍。在溫度65 ºC 之上迅速變性。在95ºC 加熱10分鐘、使用PMSF等蛋白酶抑制劑或用苯酚/氯仿抽提均可失活。理想孵育溫度為58℃,孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí);理想孵育時(shí)間為2小時(shí)。
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