發(fā)布時(shí)間: 2021-04-19 點(diǎn)擊次數(shù): 3969次
B27無(wú)血清培養(yǎng)基的基本配方:
基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),多數(shù)呈貼壁生長(zhǎng)或兼性貼壁生長(zhǎng);而當(dāng)其在無(wú)血清、無(wú)蛋白培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長(zhǎng)。
B27無(wú)血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn):
1)避免血清不同批次間的質(zhì)量差異,提高細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性。
2)避免血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用和血清源性污染。
3)避免血清組分對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的影響。
4)有利于體外培養(yǎng)細(xì)胞的分化。
5)可提高目的蛋白的表達(dá)量并使產(chǎn)品易于分離純化。
6)組分穩(wěn)定,可大量生產(chǎn)。
7)不含有絲分裂原抑制劑,可以促進(jìn)細(xì)胞增殖。
B27無(wú)血清培養(yǎng)基的使用方法:
血清仍是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長(zhǎng)狀況不良時(shí),常常會(huì)先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛以后,再換成無(wú)血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個(gè)適應(yīng)過(guò)程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無(wú)血清培養(yǎng)。在降低過(guò)程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠長(zhǎng)期培養(yǎng)于無(wú)血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。
細(xì)胞轉(zhuǎn)入無(wú)血清培養(yǎng)之前,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。