Gibco膠原酶具體使用步驟

Gibco膠原酶的使用

1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊。

 

2.將組織塊放入離心管（三角燒瓶）中加入30~50倍體積的膠原酶溶液，旋緊蓋子（密封燒瓶）。

 

3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi)，每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。

消化時(shí)間與組織的類別很有關(guān)系，對(duì)于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織，消化時(shí)間4~48h，對(duì)于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，可以認(rèn)為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后，由于上皮細(xì)胞對(duì)此酶有耐受性，可能仍有一些細(xì)胞團(tuán)未*分散，但成團(tuán)的上皮細(xì)胞比分散的單個(gè)上皮細(xì)胞更易生 長(zhǎng)，因此，如無特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理。

 

4.收集消化液（有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾），離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)瓶。