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SF9(昆蟲卵巢細(xì)胞)細(xì)胞培養(yǎng)教程
SF9(昆蟲卵巢細(xì)胞)特點(diǎn):
1.細(xì)胞靜置培養(yǎng)時(shí)半貼壁生長,也可以使用搖瓶懸浮培養(yǎng)
靜置培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞會(huì)大量附著瓶底生長,呈半貼壁狀態(tài),會(huì)有少部分細(xì)胞懸浮生長;
搖瓶培養(yǎng)時(shí)可以很快適應(yīng)懸浮生長,呈單個(gè)或小聚團(tuán)懸浮生長;
2.對(duì)溫度極為敏感
細(xì)胞于26-28℃空氣培養(yǎng),需要盡量控制溫度,保證細(xì)胞生長狀態(tài);
若溫度低于26℃,細(xì)胞生長速度會(huì)變慢,但恢復(fù)溫度后生長速度會(huì)逐漸恢復(fù),不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生過大傷害;
若溫度28℃-30℃,細(xì)胞生長嚴(yán)重受限;若溫度高于30℃,細(xì)胞將受不可逆?zhèn)?dǎo)致無法使用,即使溫度恢復(fù)也無法恢復(fù)正常生長狀態(tài);
同時(shí)注意使用的培養(yǎng)基、PBS及其他試劑應(yīng)復(fù)溫至室溫(最好26-28℃),盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)和時(shí)間;
3.細(xì)胞對(duì)吹打、氣泡等機(jī)械損傷敏感
細(xì)胞操作時(shí)若吹打力度過大、氣泡過多將嚴(yán)重影響細(xì)胞生長狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞后續(xù)存活率降低,注意操作輕柔;
4.細(xì)胞可以適應(yīng)多種培養(yǎng)體系
該細(xì)胞多用于真核細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng),因此針對(duì)該細(xì)胞有諸多培養(yǎng)體系,例如Grace's Insect Medium、SF900 II、TNM-FH、ESF921等培養(yǎng)體系,包括含血清的培養(yǎng)體系和不含血清的培養(yǎng)體系,可以根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)需要選擇逐步更換為合適的培養(yǎng)體系;
5.細(xì)胞凍存存活率不高
實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中,尚恩發(fā)現(xiàn)SF9細(xì)胞疑似表現(xiàn)出較低的凍存保存能力,凍存后活率會(huì)隨保存時(shí)間增加而逐漸下降,因此若有持續(xù)培養(yǎng)該細(xì)胞或者快速復(fù)蘇進(jìn)行實(shí)驗(yàn)需求的實(shí)驗(yàn)室建議定期復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞并重新凍存以保證細(xì)胞凍存活性不會(huì)下降至無法接受的范圍;
6.細(xì)胞貼壁培養(yǎng)后可能會(huì)伸出觸角
細(xì)胞在貼壁培養(yǎng)時(shí),一周左右會(huì)有部分細(xì)胞伸出較長觸角,同一個(gè)培養(yǎng)瓶培養(yǎng)時(shí)間越長,有觸角的細(xì)胞可能越多,這是細(xì)胞自然現(xiàn)象,非細(xì)胞交叉污染或狀態(tài)不佳;
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