Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III主要特點(diǎn)

Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III是以RNA為模板指導(dǎo)三磷酸脫氧核苷酸合成互補(bǔ)DNA（cDNA）的酶。哺乳類C型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶和鼠類B型病毒的反轉(zhuǎn)錄酶都是一條多肽鏈。鳥(niǎo)類RNA病毒的反轉(zhuǎn)錄酶則由兩上亞基結(jié)構(gòu)。真核生物中也都分離出具有不同結(jié)構(gòu)的反轉(zhuǎn)錄酶。

Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III缺乏連續(xù)性，因此要獲得像AMV反轉(zhuǎn)錄酶反應(yīng)中產(chǎn)生同樣量的cDNA就要求使用較多單位的Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III。用1微克的mRNA起始合成*條鏈的cDNA，要用8單位的M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶才相當(dāng)于1單位的Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III的作用。

 

Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III主要特點(diǎn)

Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III都具有多種酶活性，主要包括以下幾種活性。

①DNA聚合酶活性；以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過(guò)程。此酶需要RNA為引物，多為色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III中不具有3′→5′外切酶活性，因此沒(méi)有校正功能，所以由反轉(zhuǎn)錄酶催化合成的DNA出錯(cuò)率比較高。

②RNase H活性；由Invitrogen反轉(zhuǎn)錄酶III催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNase H從RNA5′端水解掉RNA分子。

③DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性；以反轉(zhuǎn)錄合成的*條DNA單鏈為模板，以dNTP為底物，再合成第二條DNA分子。